非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测试剂盒-内参法P1732

通用名称：非洲猪瘟病毒野毒株、疫苗株双重荧光PCR核酸检测试剂盒

英文名称：Dual Fluorescence PCR detection Kit for wild and vaccine strains of African swine fever virus

FAM信号通道用于检测非洲猪瘟P72特异性基因；VIC/HEX信号通道用于检测猪源特异性管家基因，不与牛肉、羊肉、鸡肉、人汗液、唾液发生特异性反应，用于质控采集样本中是否含有猪源核酸，从而判断样本采集过程是否标准，洗消是否彻底及员工是否食用猪肉制品；本品可以用于猪血液、脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体、肾脏、肌肉等样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

基线及阈值设定:根据仪器自动分析结果。如果曲线发生异常时，调整基线，起始值一般可在 3~15范围内调节，终止值一般可在 5~20范围内调节；阈值：根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线的最高点，且相交于阳性对照扩增曲线进入指数增长期的拐点。每个样品反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数即为Ct值。

1. 试验有效性判定

阳性对照在FAM通道和VIC（或HEX）通道均有典型扩增曲线且Ct值≤35；阴性对照在FAM和VIC通道均无Ct值且无扩增曲线；则试验结果有效；否则，此次试验视为无效。

2. 样品判定

（1）当待检样品FAM通道出现典型扩增曲线且Ct值≤45时，判定为非洲猪瘟病毒核酸阳性； 无Ct值或无典型扩增曲线，则判为非洲猪瘟病毒核酸阴性。

（2）当待检样品VIC（或HEX）通道出现典型扩增曲线且Ct值≤45时，判定为样品猪源核酸成分阳性；无Ct值或无典型扩增曲线，则判为猪源核酸成分阴性。

1. 本试剂盒阳性对照为含有非洲猪瘟P72基因靶标及猪源内参管家基因靶标的假病毒，假病毒较质粒更不易形成气溶胶污染，可以免核酸提取，直接加PCR反应液里面进行扩增质控；另一方面，假病毒也可以参与核酸提取步骤，用于质控提取试剂盒提取效率，在参与提取时，取10 l阳性对照+190l无核酸酶水，作为样品参与提取，应严格规范操作，防范交叉污染。

2. 本试剂盒为超敏感体系，若样品中含有猪源样本，可不必加阳性对照，VIC通道可用于扩增反应体系质控。试验人员需经过严格培训。在操作过程中对时间、试剂体积等精确控制可以获得最好的结果。

3. 实验室应严格按照有关规定分区管理，依照配液区→模板提取区→扩增区→分析区顺序进行基因检测。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。

4. 核酸提取有关耗材确保洁净、无DNase/RNase，提取过程尽量低温、快速，完成后进入下一步实验或冻保。

5. 对于顶部采光仪器要带新的一次性PE手套对荧光PCR管封盖，对于底部采光仪器要避免徒手或使用过的手套接触荧光PCR管底，检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。

6. 冻存试剂使用前应于室温下完全融化，瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融，以免影响试剂性能。

7. 样品、阳性对照等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。

8. 扩增产物禁止开盖，实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR实验室进行无害化处理。